分子診斷POCT是近幾年的熱門話題。作為未來分子診斷發(fā)展的熱門方向，分子診斷POCT集合了小巧、靈活、方便、快速、精準等特點，在應用場景和醫(yī)療器械創(chuàng)新網(wǎng)上比傳統(tǒng)的分子診斷更多更廣。這也是目前國內(nèi)外診斷企業(yè)紛紛布局這一領域原因。那么實現(xiàn)PCR分子診斷POCT一般需要具備哪些基本要素？

01、多重PCR技術

一般來講，分子POCT的擴增管比較少，所以掌握多重PCR技術能夠讓你在有限空間實現(xiàn)更多的位點檢測。

02、試劑常溫技術

分子診斷POCT能夠在應用場景上拓展，試劑常溫技術尤為關鍵。試劑常溫運輸儲存即降低冷鏈運輸?shù)某杀居謳硎褂蒙系谋憬荨?/span>

試劑常溫技術一般分為兩種：液體試劑常溫技術和干式試劑常溫技術。

液體常溫技術：

是通過對PCR體系中的酶做一些化學修飾，來實現(xiàn)酶在體系在短時間的常溫穩(wěn)定，以此實現(xiàn)常溫運輸，0-10℃或-20℃儲存。目前Taq酶的化學修飾已經(jīng)得到實現(xiàn)，但對于體系中的其他酶（如逆轉(zhuǎn)錄酶）的修飾還需更多的研究投入。

干式試劑常溫技術：

是通過對PCR體系（包含酶等活性成分）的冷凍干燥，實現(xiàn)常溫運輸常溫存儲或常溫運輸0-10℃儲存。國外廠家早在幾年前就掌握了干式試劑常溫技術，國內(nèi)目前也有不少廠家實現(xiàn)了這一技術。只是國內(nèi)廠家目前絕大部分實現(xiàn)的是干式粉末技術，對于干式球形技術掌握的極少。干式球形技術是實現(xiàn)批量化生產(chǎn)，降低成本的關鍵。

03、快速提取純化技術

經(jīng)典的分子診斷POCT即要快速也要精準，所以核酸的提取純化是精準的要素。

直擴的方法如果從體系和釋放劑的配方上深入研究，達到與提取純化后擴增的靈敏度也是有可能的，但從樣本的普適性上來講，直擴的方法范圍更窄，只能適用部分項目的某一類樣本的檢測。

核酸提取純化也不能像傳統(tǒng)的提取（提取時間一般20-30分鐘）一樣，要在提取效果和提取時間上找到平衡點，實現(xiàn)核酸快速提取純化。

04、封閉式卡盒的設計

分子診斷POCT的關鍵之一，在于封閉式卡盒的設計。“核酸的提取、加樣及擴增全過程在封閉式的小卡盒在完成。”簡單的一句話，難倒了眾多開發(fā)設計者。

難點在于快速提取過程如何移液、純化后的核酸如何加入到體系中、卡盒需要預留什么樣的機構與儀器設備配合。

突破這些難點以后，你還需要考慮如何低成本制造，試劑如何批量化生產(chǎn)。

因此設計一個可產(chǎn)業(yè)化的封閉式卡盒是實現(xiàn)分子診斷POCT的基本要素也是關鍵。

05、配套的分子診斷POCT儀器

這類儀器的基礎在于，提取部分必須能到在機械機構上配合卡盒，PCR擴增部分必須實現(xiàn)快速擴增多熒光通道擴增。